Cleachdadh agus ro-chùram air tiùb centrifuge ultrafiltration
1) Tagh tiùb ultrafiltration iomchaidh.Thoir fa-near gu bheil membran UF eadar-dhealaichte anns an ìre fulangas aca ri diofar cheimigean.Mar as trice, faodar tiùban ultrafiltration le gearradh cuideam moileciuil 10 kDa a thaghadh le gearradh cuideam moileciuil nach bu chòir a bhith nas àirde na 1/3 de chuideam moileciuil a’ phròtain ùidh, leithid 35 kDa.Ma tha cuideam moileciuil a’ phròtain inntinneach timcheall air 10 kd, faodar tiùb ultrafiltration le gearradh cuideam moileciuil de 3 KD a chleachdadh.
(2) Tha an ultrafiltration, air a cheannach às ùr, tioram, le uisge ultrapure air a chuir ris mus tèid a chleachdadh agus uisge gu tur a ’dol tron membran, amar deigh no inneal-fuarachaidh ro-fhuarachadh airson beagan mhionaidean.Tha an t-uisge an uair sin air a dhòrtadh dheth, ie an leaghan pròtain, agus dè an ìre a thèid a chur ris, ge bith dè nach eil nas motha na an loidhne gheal aig mullach an tiùba.Tha an obrachadh aotrom, agus feumar an tiùb ultrafiltration a bhith air a ro-fhuarachadh air deigh mus cuir thu am fuasgladh pròtain ris.
3) Bha an dà chuid tomad agus meadhan grabhataidh gus an cothromachadh a ruighinn.Thoir an aire nach eil an astar cuairteachaidh agus an luathachadh gu math luath, air neo a’ dèanamh cron dìreach air an membran ultrafiltration.Chaidh ultrafiltration centrifugal a thòiseachadh (centrifuge ro-fhuarachadh gu 4 ceum).Às deidh an RPM de dhiofar centrifuges a thionndadh gu g, bha e eadar-dhealaichte.Chaidh luathachadh an centrifuge atharrachadh chun ìre as ìsle, a’ lughdachadh cuideam air an membran.Thoir an aire, bi cinnteach gum fàg thu an centrifuge às deidh don centrifuge an astar ceann-uidhe aige a ruighinn, no ma tha duilgheadas agad, chan urrainn dhut a làimhseachadh airson a’ chiad uair.Chaidh stiùireadh an membran don fhearsaid atharrachadh a rèir an stiùiridh (tha cùis ceud-ghluasadach ceàrnach mar membran gu axis perpendicular).Ann an cleachdadh practaigeach, tha an astar cuairteachaidh coitcheann nas ìsle na an stiùireadh, gus an tèid beatha an tiùba centrifuge a leudachadh.
3) Bha an dà chuid tomad agus meadhan grabhataidh gus an cothromachadh a ruighinn.Thoir an aire nach eil an astar cuairteachaidh agus an luathachadh gu math luath, air neo a’ dèanamh cron dìreach air an membran ultrafiltration.Chaidh ultrafiltration centrifugal a thòiseachadh (centrifuge ro-fhuarachadh gu 4 ceum).Às deidh an RPM de dhiofar centrifuges a thionndadh gu g, bha e eadar-dhealaichte.Chaidh luathachadh an centrifuge atharrachadh chun ìre as ìsle, a’ lughdachadh cuideam air an membran.Thoir an aire, dèan cinnteach gum fàg thu an centrifuge às deidh don centrifuge an astar ceann-uidhe aige a ruighinn, no ma tha duilgheadas agad, chan urrainn dhut a làimhseachadh airson a’ chiad uair.Chaidh stiùireadh an membran don fhearsaid atharrachadh a rèir an stiùiridh (tha cùis ceud-ghluasadach ceàrnach mar membran gu axis perpendicular).Ann an cleachdadh practaigeach, tha an astar cuairteachaidh coitcheann nas ìsle na an stiùireadh, gus an tèid beatha an tiùba centrifuge a leudachadh.
(4) Nuair a thèid a chuimseachadh chun an 1ml a tha air fhàgail, gabh 50ul de fhuasgladh bufair, cuir 10ul de shruth troimhe agus faic a bheil dath gorm sam bith ann, mar bhreithneachadh a bheil pròtain a dhìth air an tiùb ultrafiltration.Ma tha an tiùb ag aoidionach, cuir a-rithist an t-sreath àrd agus sruthadh a-steach do phìob ùr gus ultrafiltration a thòiseachadh.Gus faighinn a-mach gu cinnteach an deach tiùban a chall, cuir centrifuge airson 10min le 5mgml de BSA mus tèid iad air adhart, ruith air glaodh pròtain, no measadh amh Bradford, agus lean ort le bhith a’ cur ris an fhuasgladh pròtain tiugh a tha air fhàgail (a bhios ag obair air deigh agus a chuireas casg air pròtainean bho theasachadh) gus chaidh an dùmhlachd gu lèir a chuir ris.Bi faiceallach aig àm centrifugation ma thachras sileadh pròtainean, a’ leantainn gu dùnadh tiùba.Ma thachras sileadh, dèan cinnteach an e adhbhar sònraichte sileadh cus dùmhlachd pròtain no bufair neo-iomchaidh;Faodar a ’chiad fhear fhuasgladh le bhith a’ sìolachadh grunn phìoban ultrafiltration aig an aon àm, a ’lughdachadh an dùmhlachd, agus an tè mu dheireadh le bhith ag iomlaid diofar fhuasglaidhean bufair gus nach tachair sileadh pròtain.
(4) Nuair a thèid a chuimseachadh chun an 1ml a tha air fhàgail, gabh 50ul de fhuasgladh bufair, cuir 10ul de shruth troimhe agus faic a bheil dath gorm sam bith ann, mar bhreithneachadh a bheil pròtain a dhìth air an tiùb ultrafiltration.Ma tha an tiùb ag aoidionach, cuir a-rithist an t-sreath àrd agus sruthadh a-steach do phìob ùr gus ultrafiltration a thòiseachadh.Gus faighinn a-mach gu cinnteach an deach tiùban a chall, cuir centrifuge airson 10min le 5mgml de BSA mus tèid iad air adhart, ruith air glaodh pròtain, no measadh amh Bradford, agus lean ort le bhith a’ cur ris an fhuasgladh pròtain tiugh a tha air fhàgail (a bhios ag obair air deigh agus a chuireas casg air pròtainean bho theasachadh) gus chaidh an dùmhlachd gu lèir a chuir ris.Bi faiceallach aig àm centrifugation ma thachras sileadh pròtainean, a’ leantainn gu dùnadh tiùba.Ma thachras sileadh, dèan cinnteach an e adhbhar sònraichte sileadh cus dùmhlachd pròtain no bufair neo-iomchaidh;Faodar a’ chiad fhear fhuasgladh le bhith a’ sìolachadh grunn phìoban ultrafiltration aig an aon àm, a’ lughdachadh an dùmhlachd, agus an tè mu dheireadh le bhith ag iomlaid diofar fhuasglaidhean bufair gus nach tachair sileadh pròtain.
(5) Thathas a’ cleachdadh a’ chiad beagan cheumannan gus am pròtain a chuimseachadh, agus ma tha am bufair gu bhith air atharrachadh, cuir gu socair bufair ùr (ultrafiltration tro membran ultrafiltration 0.22um) gu timcheall air 1ml de phròtain iomlan, agus ath-chruinnich gu timcheall air 1ml airson trì. amannan an dèidh a chèile, leis an tomhas-lìonaidh deireannach cuimseach deireannach a rèir an dùmhlachd pròtain a tha thu ag iarraidh, sa chumantas gun a bhith nas àirde na 500ul, ach cuideachd taobh a-staigh 200ul.Coilean 1000 × no barrachd trì tursan, gu h-àraidh uiread de dh'atharrachadh bufair, mar a thèid a thomhas le co-dhiù 10 × no mar sin beairteas tomhas-lìonaidh gach turas.
(5) Thathas a’ cleachdadh a’ chiad beagan cheumannan gus am pròtain a chuimseachadh, agus ma tha am bufair gu bhith air atharrachadh, cuir gu socair bufair ùr (ultrafiltration tro membran ultrafiltration 0.22um) gu timcheall air 1ml de phròtain iomlan, agus ath-chruinnich gu timcheall air 1ml airson trì. amannan an dèidh a chèile, leis an tomhas-lìonaidh deireannach cuimseach deireannach a rèir an dùmhlachd pròtain a tha thu ag iarraidh, sa chumantas gun a bhith nas àirde na 500ul, ach cuideachd taobh a-staigh 200ul.Coilean 1000 × no barrachd trì tursan, gu h-àraidh uiread de dh'atharrachadh bufair, mar a thèid a thomhas le co-dhiù 10 × no mar sin beairteas tomhas-lìonaidh gach turas.
Ùine puist: Samhain-09-2022