Grunn enzymes air an cleachdadh gu cumanta ann an deuchainnean PCR

Freagairt slabhraidh polymerase, air a ghiorrachadh marPCRann am Beurla, na dhòigh bith-eòlas moileciuil a thathas a’ cleachdadh gus pìosan DNA sònraichte a mheudachadh.Faodar a mheas mar ath-riochdachadh DNA sònraichte taobh a-muigh na buidhne, a dh’ fhaodadh meud glè bheag de DNA a mheudachadh gu mòr.Rè an iomlanPCRpròiseas ath-bhualadh, tha àite deatamach aig aon chlas de stuthan - enzymes.

1. Taq DNA

Ann an deuchainnean anns na tràth làithean aPCR, chleachd luchd-saidheans Escherichia coli DNA polymerase I, Ach tha duilgheadas ann leis an enzyme seo: feumaidh e enzym ùr ath-lìonadh a h-uile uair a thèid cearcall a dhèanamh, a tha a’ dèanamh na ceumannan obrachaidh beagan iom-fhillte agus tha e duilich a mheudachadh gu fèin-ghluasadach.Chaidh an duilgheadas seo fhuasgladh às deidh do luchd-saidheans Taq DNA polymerase a sgaradh bho Thermus aquaticus gu tubaisteach ann an 1988. Bhon uairsin, tha leudachadh fèin-ghluasadach DNA air a thighinn gu buil.Bidh lorg an enzyme seo cuideachd a’ dèanamhPCRteicneòlas a tha goireasach, practaigeach agus uile-choitcheann.An-dràsta, is e Taq DNA polymerase am polymerase as cumanta ann an innealan DNA.

2. PfuDNA

Mar a chaidh ainmeachadh gu h-àrd, tha bug mòr aig Taq DNase, agus mar sin tha luchd-saidheans air Taq DNA polymerase atharrachadh gu ìre gus leudachadh neo-shònraichte a sheachnadh mar thoradh air mì-chothromachadh, agus mar thoradh air sin tha toraidhean deuchainn mearachdach.Ach faodaidh atharrachadh Taq DNA polymerase bacadh a chuir air gnìomhachd DNA polymerase aig teòthachd an t-seòmair.Faodaidh PfuDNA polymerase dèanamh suas gu math airson na h-eas-bhuannachdan gu h-àrd de Taq DNA polymerase, gus an tèid an ath-bhualadh PCR a dhèanamh gu h-àbhaisteach, agus faodar ìre soirbheachaidh leudachadh gine targaid a leasachadh gu h-èifeachdach.

3. Reverse Transcriptase

Chaidh transcriptase reverse a lorg ann an 1970. Bidh an enzym seo a’ cleachdadh RNA mar theamplaid, dNTP mar fho-strat, a’ leantainn prionnsapal co-chàradh bun-stèidh, agus a’ co-chur aon iallan DNA a tha co-phàirteach ris an teamplaid RNA anns an t-slighe 5′-3′.Tha transcriptase cùil gu mòr an urra ri gnìomhachd DNA polymerase bho theamplaidean DNA no RNA agus mar sin chan eil gnìomhachd exonuclease 3 ′-5 ′ ann.Ach, tha gnìomhachd RNase H aige, a tha a’ cuingealachadh fad synthesis transcriptase cùil gu ìre.Air sgàth dìlseachd ìosal agus teirm-sheasmhachd transcriptase cùil fiadhaich, dh’ atharraich luchd-saidheans e cuideachd.

AirsonPCRdeuchainnean, is e na prìomh stuthan consum: tiùb PCR fa leth, tiùb PCR 4/8-stiall, truinnsearan PCR.

Labio'sStuthan consum PCRtha na leanas agadbuannachdan:

Plataichean PCR: Co-fhreagarrachd cearcall teirmeach farsaing;Coimeas àrd, furasta aithneachadh gu math;gu math meòrachadh fluorescence; mathgluasad teas;DNase dearbhte, RNase, DNA, luchd-bacadh PCR, agus deuchainn gun pyrogen.

Tiùban PCR fa leth: Evaporation-resistant; mathgluasad teas;soilleireachd optigeach sàr-mhath; DNase dearbhte, RNase, DNA, luchd-dìon PCR, agus deuchainn gun pyrogen.

Tiùban PCR 4/8-strips: Ballachan ultra-tana; soilleireachd àrd; meòrachadh fluorescence math;faodar a chleachdadh ann an gnìomhachas cungaidh-leigheis, gnìomhachas a’ bhidhe, agus bith-eòlas moileciuil; stuth àrd-inbhe, maighdeann PP; DNase dearbhte, RNase, DNA, bacadh PCR, agus deuchainn gun pyrogen.